개념 한 쪽
수질환경기사 미생물·생태독성 시료 전처리 및 보관 — 루골 용액 보전·대장균군 정량·생태독성 용어
식물성 플랑크톤의 루골 용액 보전과 계수 농도, 총대장균군 시료의 잔류염소 제거와 고형물 균질화, 최적확수법과 막여과법의 차이, 물벼룩 급성독성 시험 용어를 익힌다.
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뜻
식물성 플랑크톤 시료는 채취한 뒤 즉시 보전해야 세포 변형을 막을 수 있다. 침강성이 좋지 않은 남조류나 파괴되기 쉬운 와편모조류는 포르말린을 쓰면 세포가 파괴되거나 모양이 변하기 쉬우므로, 루골 용액을 1~2 V/V% 첨가해 보전한다. 3~5%는 농도가 지나쳐 적정하지 않다. 루골 용액은 요오드와 요화칼륨을 물에 녹인 용액으로, 세포를 착색해 형태를 고정하므로 현미경에서 식별하기 쉬워진다. 란탄이나 묽은 황산은 이 용도의 보전제로 쓰지 않는다.
계수할 때는 시료가 진하면 증류물로 희석해 관찰하기 쉽게 만든다. 분석은 종을 확인하는 정성분석과 개체수를 세는 정량분석으로 나뉘고, 개체수는 계수면적당 100~300마리 정도가 되도록 맞춘다. 100~250마리로 맞춘다는 설명은 이 범위에서 벗어난다. 시료를 바로 검사하지 못할 때는 포르말린 용액을 넣어 보존한다.
총대장균군 시료는 채취할 때 잔류염소를 먼저 없앤다. 염소가 남아 있으면 균이 죽어 결과가 낮게 나오므로 티오황산나트륨으로 제거하고, 10℃ 이하로 낮춰 운반한다. 액상 시료는 진탕해 균일하게 만든다. 고형물이 섞인 시료는 여과하지 않고 멸균 희석액과 함께 균질화한다. 여과하면 고형물에 붙어 있던 세균까지 걸러져 검출되지 않는다.
대장균군 정량은 방법에 따라 갈린다. 최적확수법(MPN)은 시료를 희석해 유당 배지에 넣고 배양한 뒤 가스가 발생한 시험관 수를 통계 처리하며, 단위는 MPN/100mL이고 막여과장치는 쓰지 않는다. 막여과법은 시료를 막에 걸러 집락을 세는 정량법으로, 다량의 시료를 처리해 신뢰성이 높고 실험 기간이 짧으며 집락수와 여과한 시료량으로 결과를 계산한다. 추정·확정·완전의 정성시험 순서는 막여과법의 특징이 아니다.
물벼룩 급성독성 시험에서는 용어를 엄격히 구분한다. 치사는 시험용기를 살짝 흔들었을 때 15초 동안 아무 반응이 없는 상태이고, 유영저해는 몸통을 이용해 유영하지 못하는 상태이다. 반수영향농도(EC50)는 시험 생물의 50%가 치사 또는 유영저해를 보이는 농도이다. 생태독성값은 EC50에 생체축적 정도를 반영한 값이 아니며, 생체축적은 생체농축계수(BCF)로 따로 평가한다. 지수식 시험방법은 농도를 일정 비율로 증가시킨 계열을 준비해 EC50을 구하는 방식이지, 시험 중 용액을 교환하는 방식이 아니다.
예제
선지 판단은 남조류·와편모조류 시료에 루골 용액 1~2 V/V%를 넣는지, 3~5%처럼 농도를 높이거나 포르말린을 쓰는지, 총대장균군 시료에서 잔류염소를 티오황산나트륨으로 제거하고 10℃ 이하로 운반하는지, 고형물 시료를 여과 없이 희석액과 균질화하는지, 최적확수법에 막여과장치를 붙이는지에서 갈린다. 파괴되기 쉬운 조류에 루골 1~2%를 고른 선지가 맞고, 3~5%나 포르말린을 고른 선지, 잔류염소를 그대로 둔 선지, 고형물 시료를 여과한다는 선지, 최적확수법에 막여과장치가 필요하다는 선지는 어긋난다. 물벼룩 시험에서 생태독성값을 EC50에 생체축적을 반영한 값으로 설명하거나, 지수식 시험방법을 시험 중 용액 교환으로 설명하는 선지도 성립하지 않는다.
자주 묻는 물음
- 남조류나 와편모조류 시료는 무엇으로 보전하나요?
- 루골 용액을 1~2 V/V% 첨가합니다. 이 조류는 포르말린에서 세포가 파괴되거나 모양이 변하기 쉽고, 3~5%는 농도가 지나칩니다. 루골 용액은 요오드와 요화칼륨의 용액으로 세포를 착색해 형태를 고정합니다.
- 총대장균군 시료는 채취할 때 어떻게 처리하나요?
- 잔류염소를 티오황산나트륨으로 제거하고 10℃ 이하로 낮춰 운반합니다. 잔류염소가 있으면 균이 죽어 결과가 실제보다 낮게 나옵니다. 액상 시료는 진탕하고, 고형물이 섞인 시료는 여과하지 않고 멸균 희석액과 함께 균질화합니다. 여과하면 세균이 걸러져 검출되지 않습니다.
- 최적확수법과 막여과법, 물벼룩 시험 용어는 어떻게 구분하나요?
- 최적확수법은 희석 배양 뒤 가스 발생 관수를 통계 처리하고 단위는 MPN/100mL이며 막여과장치를 쓰지 않습니다. 막여과법은 막에 걸러 집락을 세는 정량법으로 기간이 짧고 집락수와 여과 시료량으로 계산합니다. 물벼룩 시험에서 치사는 15초 동안 무반응, EC50은 50%가 치사 또는 유영저해를 보이는 농도이고, 생태독성값은 EC50에 생체축적을 반영한 값이 아닙니다.
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