개념 한 쪽
바이오화학제품제조기사 안전관련 설비 및 점검방법 — 무균조작과 배지 살균
배지와 배양 공정에서의 안전과 점검은 무균조작과 적절한 살균법을 통해 확보한다. 열에 약한 성분은 여과로 처리하고, 배지 성분의 역할을 구분하여 조제 시 혼동을 피해야 한다. 한천 농도, 질소원과 탄소원의 구분, 펩톤 원료 등 기본 개념을 숙지하여 점검 항목을 판단한다.
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뜻
무균조작은 외부 오염을 차단하기 위한 일련의 조작 절차를 말한다. 계대배양이나 접종 시에는 튜브 입구를 열기 전과 닫은 후에 불꽃으로 살균하여 공기 중 오염 미생물이 유입되는 것을 방지해야 한다. 접종 도구는 완전히 가열한 뒤 식혀 사용하여 살아 있는 미생물을 손상시키지 않도록 관리한다.
배지 조제와 살균은 배지 성분의 열안정성을 고려하여 분리 처리해야 한다. 비타민처럼 열에 약한 성분은 여과(필터) 살균으로 처리하고, 당류나 무기염류처럼 열에 견디는 성분은 가열 살균으로 처리한 뒤 무균 조건에서 혼합하여 사용한다. 전체를 고온으로 처리하면 열민감성 성분이 파괴되어 배지 성능이 저하된다.
배지 구성 성분의 역할을 구분하는 능력이 중요하다. 한천은 배지의 고형화제로서 전체 배지 대비 통상 1.5%~2.0% 농도가 표준이며, 너무 낮으면 고형화되지 않고 너무 높으면 과도하게 단단해진다. 몰라시(Molasses)는 주로 탄소원으로 사용되는 당류 공급원이며, 암모늄 염은 산업적으로 널리 쓰이는 무기 질소원이다.
펩톤은 단백질을 부분 가수분해하여 만든 물질로서 고단백 원료(육류, 카제인, 대두박 등)로부터 제조한다. 당밀(Molasses)과 같은 탄수화물 원료는 펩톤의 원료가 될 수 없으므로, 배지 성분을 판별할 때 '펩톤은 단백질 유래'라는 점을 기준으로 삼는다.
예제
계대배양 관련 문제에서 정답은 튜브 입구를 열기 전과 닫은 후에 불꽃으로 살균하여 오염을 방지하는 절차이다. 보기에서 접종 도구를 살짝 불로 태우는 것으로 충분하다고 하거나 튜브 입구 살균 시점을 잘못 제시하면 오답으로 본다. 배지 살균 문제에서는 열민감성 성분을 전부 가열 처리하는 선택지는 성분 파괴를 유발하므로 틀리다. 대신 열에 강한 성분은 가열, 열에 약한 성분은 여과로 무균화한 뒤 무균 조건에서 혼합하는 절차를 옳다고 본다. 배지 성분 문제에서는 한천의 표준 범위 1.5%~2.0%와 몰라시의 탄소원 역할, 암모늄 염의 질소원 역할, 펩톤의 단백질 기원 여부를 기준으로 오답을 소거한다.
자주 묻는 물음
- 계대배양 시 튜브 입구는 언제 살균해야 하나?
- 튜브를 열기 전과 닫은 후에 튜브 입구를 불꽃으로 살균하여 공기 중 오염미생물이 튜브 내부로 들어가는 것을 차단해야 한다.
- 열에 약한 배지 성분이 포함된 경우 살균은 어떻게 해야 하나?
- 열에 강한 성분은 가열 살균으로, 열에 약한 비타민 등은 여과 살균으로 무균화한 뒤 무균 조건에서 혼합해야 한다.
- 한천 배지의 적정 농도와 몰라시·암모늄 염의 역할은 무엇인가?
- 한천은 고형화제로서 전체 배지 대비 통상 1.5%~2.0%가 적정 범위이다. 몰라시는 주로 탄소원(당류)으로 사용하고, 암모늄 염은 산업적으로 널리 쓰이는 무기 질소원으로 이용된다.
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