개념 한 쪽
배지조제와 관련된 핵심은 무균 조작 원칙과 균주 보존 방법을 구분하는 것이다. 계대배양 시 튜브 입구의 불꽃 살균과 접종 도구의 충분한 가열 후 냉각, 산소 차단을 이용한 유동파라핀 중층법, 동결보존 시 동결 보호제의 선택, 동결건조의 승화 원리 등을 숙지해야 한다.
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출제기준 단원 「배지조제」의 공개 문제 3개를 묻는 꼴별로 나누면 이렇습니다.
| 묻는 꼴 | 문제 수 | 무엇을 묻나 |
|---|---|---|
| 무균 조작의 핵심 절차 판단 | 1 | 계대배양 시 튜브 입구와 접종 도구의 올바른 살균·취급 시점을 가리기 |
| 분자생물학 용어 정의 구별 | 1 | 유전자 내 비암호서열과 암호서열의 구분을 설명하는 용어 이해 |
| 보존법 원리와 적용 균주 매칭 | 1 | 산소 차단, 저온, 승화 등 보존 원리별로 적합한 방법을 고르기 |
계대배양은 미생물을 새로운 배지로 옮겨 기르는 작업으로, 외부 오염을 막는 무균 조작이 핵심이다. 접종용 바늘이나 루프는 완전히 달궈 멸균한 뒤 사용 전 반드시 식혀서 미생물이 열로 죽지 않게 처리한다. 유리 튜브의 입구는 뚜껑을 열기 전과 닫은 후에 불꽃으로 살균하여 공기 중 오염미생물의 유입을 최소화하는 절차를 지킨다.
균주를 장기간 보존하는 방법은 원리별로 구분된다. 산소 공급을 차단하여 대사를 억제하는 유동파라핀 중층법은 곰팡이와 효모처럼 호기성이지만 산소 차단 시 대사 억제가 유리한 균주에 적합하다. 극저온 보존은 액체질소 같은 방법이 가장 낮은 온도를 제공하여 대사 활동을 사실상 멈추게 하는 방식이다.
동결보존 시에는 세포 내 얼음 결정 형성으로 인한 손상을 방지하기 위해 동결 보호제를 첨가한다. 대표적인 동해방지제로는 글리세롤, DMSO, 설탕(또는 유당) 등이 있고, 염화나트륨은 동해방지제로 쓰이지 않는다. 동결건조법(리오필라이제이션)은 시료를 동결한 뒤 진공 하에서 얼음이 승화하여 수분을 제거하는 원리를 이용하여 보존한다.
균주와 관련된 정보 접근 시에는 기본 검색 결과와 상세 정보 항목을 구분해야 한다. 기관의 검색 결과에는 자원번호, 학명, 안전등급(BSL), 가격 등 기본 식별 및 분양 정보가 포함되며, 영양요구성이나 병원성 여부와 같은 세부 생리·병리 정보는 상세페이지에서 확인하는 것이 일반적이다.
무균 조작 관련 문제에서는 '튜브 입구 살균 시점=열기 전과 닫은 후'와 '도구는 충분히 달군 뒤 식혀서 사용'이라는 두 가지 원칙을 적용하면 정답을 고를 수 있다. 보존법 비교 문제에서는 원리(산소 차단, 저온, 건조)를 기준으로 유동파라핀 중층법, 액체질소 보존, 동결건조법을 구분하면 오답을 피할 수 있다. 동결보존제 선택 문제에서는 글리세롤·DMSO·설탕을 동해방지제로 떠올리고, 염화나트륨·지방산 등은 제외하는 방식으로 접근하면 효율적이다.
계대배양시 지켜야할 규칙으로 맞는 것은?
정답 ③ · 문항은 계대배양 시 무균 조작에서 준수해야 할 규칙을 묻는다. 튜브 입구는 뚜껑을 열기 전과 닫은 후에 불꽃으로 살균하여 공기 중 오염원을 차단하는 것이 표준 절차이다.
계대배양 시 멸균된 도구를 사용할 때, 튜브 입구는 열기 전후로 불꽃 살균하여 오염을 방지해야 합니다.
집적배양법(enrichment culture)을 가장 잘 설명하는 것은?
정답 ② · 문항은 집적배양법(enrichment culture)의 정의를 묻고 있다. 집적배양법은 분리원 전체를 폭넓게 키우는 것이 아니라 목적 미생물에 유리한 환경을 조성하여 그 균주가 선택적으로 증식하도록 유도하는 방법으로, 희소한 목적균을 분리·증대시키기 위한 선택적 배양법에 해당한다.
계대배양법을 변형시킨 방법으로 산소의 공급을 제한하여 대사를 억제하는 방법이며, 곰팡이나 효모에 적합한 균주의 보존법은?
정답 ② · 문항은 계대배양법 변형으로 산소 공급을 차단하여 대사를 억제하는 균주 보존법을 묻고 있다. 유동파라핀(파라핀 오일)으로 배지 표면을 덮어 산소 확산을 차단하면 산소 요구도가 높은 미생물의 대사가 억제되어 장기간 보존에 유리하며 곰팡이·효모 보존에 적합하다.
산소 공급을 제한하여 대사를 억제하는 계대배양 변형법은 유동파라핀 중층 보존법이다.
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